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本试剂盒可用于从酵母中分离出完整而纯化的线粒体。其制备物，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。

试剂盒组成：

组份	50T	100T
蜗牛酶	500mg	1g
山梨醇缓冲液	30mL	60mL
原生质体裂解液	100mL	200mL
β-巯基乙醇	1mL	1mL
线粒体清洗液	25mL	50mL
线粒体保存液	5mL	10mL

保存条件：4℃可保存3个月，长期保存可置-20℃。

操作步骤：
1．取新鲜培养的1-5ml酵母培养物(不超过5×10⁷细胞，湿重50mg或者50μl体积)离心后的收集物（4℃，1000×g离心5min）。双蒸水洗一到两次。离心，尽量弃上清。取50μl山梨醇缓冲液洗一次，离心，弃上清。
2．酵母沉淀用0.5ml山梨醇缓冲液重悬，加入10mg蜗牛酶，再加入5μl?β-巯基乙醇，混匀（如果一次提取样本较多，可取0.5ml山梨醇缓冲液重悬，加入10mg蜗牛酶，再加入5μl?β-巯基乙醇预混匀，混匀后每管样本加入0.5ml重悬酵母），30℃水浴1-2小时。4℃，1000×g离心5min，弃上清，得到原生质体。将得到的原生质体用0.5ml原生质体裂解液重悬，再次离心，弃上清，得到原生质体。
3．将得到的原生质体用0.5ml原生质体裂解液重悬，并转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨10～20次；
4．将研磨物放置合适的离心管，4℃，1000×g离心5min；
5．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。
6．在线粒体沉淀中加入0.5mL线粒体清洗液重悬线粒体沉淀，4℃，1000×g离心5min；
7．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；
8．用50 -100μL线粒体保存液或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事项：
1．以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
2．β-巯基乙醇有毒，请注意通风及防护。

一般低温度心机都有离心力显示，如果没有，可以用以下公式简单的换算。
  G＝1.11×(10^-5)×R×[rpm]²
G为离心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍数来表示；[rpm]²即：转速的平方；R为半径，单位为厘米。
相关搜索：酵母线粒体提取试剂盒，Yeast Mitochondrion Extraction Kit